紫外分光光度法(一)--仪器校正和溶剂要求

1.仪器的校正和检定
　　由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83、 253.65、 275.28、296.73、313.16、334.15、365.02、404.66、435.83、546.07与576.96nm，或用仪器中氘灯的486.02与656.10nm谱线进行校正,钬玻璃在279.4、287.5、333.7、360.9、418.5、460.0、484.5、536.2与637.5nm波长处有尖锐吸收峰,也可作波长校正用,但因来源不同会有微小的差别，使用时应注意。
　　吸收度的准确度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，按下表规定的波长处测定并计算其吸收系数。 规定的吸收系数如下表，相对偏差可在±1％以内。
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波　　长　　(nm)　│ 235(最小)│ 257(最大)│ 313(最小)│350(大)
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吸收系数E1％　1cm │　124.5 　│　144.0 　│　　48.62 │106.6
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杂散光的检查可按下表的试剂和浓度，配制成水溶液,置1cm石英吸收池中，在下表规定的波长处测定透光率，应符合表中的规定。
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　　试　　剂　│ 浓度％ (g/ml)│ 测定用波长(nm) │透光率(％)
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　　碘　　化　　钠│　　1.00　　　│　　　220 　　　│　　<0.8
　　亚 硝 酸 钠 │　　5.00　　　│　　　380 　　　│　　<0.8
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　　2.对溶剂的要求
　　测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求；即用1cm石英吸收池盛溶剂,以空气为空白（即空白光路中不置任何物质）测定其吸收度,溶剂和吸收池的吸收度,在220～240nm范围内不得超过0.40；在241～250nm范围内不得超过0.20；在251～300nm范围内不得超过0.10， 在300nm以上时不得超过0.05。