产品组成
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Catalog #
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PD1520-00
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PD1520-01
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PD1520-02
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Preps
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2
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10
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25
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ezBindTM Columns
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2
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10
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25
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Buffer A1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer B1
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer N3
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8 mL
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40 mL
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85 mL
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Buffer KB
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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Buffer RET
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22 mL
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110 mL
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270 mL
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RNase A(20 mg/mL)
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2.2 mg
(110 μL)
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11 mg
(550 μL)
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27 mg
(1.35 mL)
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Endofree Elution Buffer
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5 mL
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25 mL
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60 mL
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User Manual
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1
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1
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1
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注意事项：
1. 质粒拷贝数: 纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同体积的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
2. 转化菌: 若为-70oC甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。
3. 切勿直接取冻存的菌进行培养。
操作简要步骤：
1. 取100 µL新鲜的菌液接种到150-200 mL (勿超过 200 mL)的LB培养基（含适量抗生素），37oC震荡培养14-16小时。室温下5,000 x g离心10分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。
2. 加入10 mL Buffer A1（确保已加入RNase A），用移液器或涡流震荡确保细菌沉淀重新悬浮。
3. 加入 10 mL Buffer B1, 轻轻地反转5-10 次以混合均匀，然后静置2-5分钟至溶液粘稠而澄清。
4. 加入3 mL Buffer N3, 立即反转5次，用手用力摇晃3-5次充分混匀，此时出现白色絮状沉淀。
5. 将离心管转至高速离心机，在室温下12,000 x g离心10分钟（若上清中有白色沉淀，可再次离心）。
6. 转移上清液20 mL（不超过20 mL）至新的50mL离心管中，加入0.5倍体积的Buffer RET (即每20 mL裂解液加入10 mL Buffer RET) 及10 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混匀，需马上离心过DNA柱。
7. 立即转移20 mL裂解液/收集管至带收集管的DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。将剩余溶液转移至DNA柱中，室温下> 2,500 x g离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复直至所有的溶液通过DNA柱。
8. 可选：向离心柱中加入10 mL Buffer KB，室温下> 2,500 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。
9. 向离心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室温下> 2,500 x g离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将离心柱重新放回到收集管中。重复步骤“9”。
10. 将离心柱放回高速离心机中，室温下5,000 x g开盖离心10分钟，以彻底去除残留的乙醇。
11. 将离心柱转至一个新的50 mL离心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL 的Endofree Elution Buffer，室温放置1分钟，> 2,500 x g离心5分钟，以洗脱质粒DNA。将50 mL离心管中的洗脱液上柱再放置洗脱1分钟，> 2,500 x g离心5分钟。 两次洗脱将提高得率。
