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Western Blotting 常见问题解答
1、胶片上存在反转印象？膜上有黄色或棕色的沉积？在暗室中条带过于明亮？条带的发光时间持续了至少8 小时？
可能原因：HRP 的浓度过高；
解决办法：稀释HRP 至少10 倍。
2、信号太弱或没有？
可能原因：
1.太多的HRP 积聚导致信号快速的消退；
2.抗原或抗体的浓度不够；
3.转印不成功；
4.HRP 或其他底物的效价降低。
解决办法：
1.稀释HRP 至少10 倍；
2.增加其浓度；
3.寻找合适的转移方法和条件；
4.选择其他的合适底物。
3、背景高？
可能原因：
1.HRP 浓度过高；
2.封闭无效；
3.不适合的封闭试剂；
4.洗涤不充分和洗涤液的量；
5.胶片曝光过度；
6.抗原或抗体的浓度太高。
解决办法：
1.稀释HRP 至少10 倍；
2.寻找合适的封闭方法；
3.选用其他的封闭试剂；
4.增加洗涤的时间,次数；
5.减少曝光时间；
6.稀释抗原或抗体。
4、蛋白质条带上有空泡影像？
可能原因：
1.蛋白质没有被充分转印；
2.膜没有预先浸湿；
3.在胶片和膜之间有气泡。
解决办法：
1.寻找合适的转移方法和条件；
2.在转印前充分浸湿；
3.在暴光之前赶走气泡。
5、胶片上背景弥散？
可能原因：HRP 标记的抗体出现了积聚；
解决办法：稀释HRP 至少10 倍。
6、无特异性条带？
可能原因：
1.HRP 浓度过高；
2.SDS 促使非特异蛋白质条带黏附在目的蛋白质条带上。
解决办法：
1.稀释HRP 至少10 倍；
2.在操作过程中不要加SDS。
